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【答案】

(1)脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖

(2)平；537bp、790bp、661bp

(3)4

(4)BamHI；抗生素B；同种限制酶切割形成的末端相同,部分目的基因D与质粒反向连接

【解析】

(1)在一条脱氧核苷酸链上,相邻两个脱氧核苷酸之间通过3,5-磷酸二酯键相连,所以相邻碱基之间通过脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖相连接。

(2)SmaI识别并切割的序列为CCC$\downarrow $GGG,所以产生的末端为平末端,图1中DNA片段有两个SmaI识别序列，经SmaI切割后,DNA片段会形成三个小的DNA片段,按切割位点算分别是534bp+3bp=537bp; 796bp-3bp-3bp=790bp;658bp+3bp=661bp。

(3)杂合子基因型为Dd。用SmaI切割基因D,会形成537bp、790bp、661bp3种类型。基因D突变成基因d后,C-G被T-A替换,失去了一个酶切位点,用SmaI切割基因d则会形成534bp+796bp-3bp=1327bp和658bp+3 bp=661bp2种类型。所以一共会得到537bp、790bp、132bp、661bp4种类型的片段。

(4)如果要获得完整的目的基因可用BamHI和MboI切割,但是MboI会破坏抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因,质粒会失去标记基因,无法筛选,所以只能用BamHI切割。用BamHI切割后破坏了抗生素A抗性基因,所以质粒上存在的标记基因是抗生素B抗性基因,因此,在加入抗生素B的培养基上进行培养、筛选,经过同种限制酶切割后会产生相同的黏性末端,部分目的基因与质粒反向连接导致目的基因无法正常表达。

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